一个GST融合蛋白,分子量大概60 kDa ,经亲和层析纯化后,SDS电泳检测,有3条主要的蛋白带( 也有其他的杂蛋白带),最浓的是我的目的蛋白,但是另外两条带的浓度也很大,这两条带的大小加起来差不多是目的蛋白的大小?

怀疑是阵解,可以用GST抗体做WB看看有几条,如果还是三条那是降解,如果不是,那就没有阵解,在纯化的平衡缓冲液中加0.5M盐,看能不能去掉杂带,此外可以用不同浓度的GSH洗脱试试,破碎的时候超声别太强,时间别太长。也可以加点酶抑制剂试试。