GeneDelta 基因敲除/定点突变试剂盒

 

产品概述:

    CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats) 是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在该机制中,Cas蛋白(CRISP-associated protein)含有两个核酸酶结构域,可以分别切割两条DNA 链。一旦与 crRNA(CRISPR RNA)和 tracrRNA 结合形成RNA复合物,Cas 蛋白中的核酸酶即可对与RNA复合物结合的 DNA 进行切割。切割后 DNA 双链断裂从而使入侵的外源 DNA 降解。

赢润生物基于CRISPR/Cas9技术强势推出GeneDeltaTM基因敲除试剂盒和基因定点突变试剂盒,本试剂盒将crRNA及tracrRNA序列整合成为sgRNA序列,正确引导Cas蛋白切割目标DNA序列或进行定点突变,具有高效快速、操作简单、准确度高等优点,可广泛用于体内和体外水平的基因敲除或基因订单突变研究。

*本试剂盒中使用的是用cas9蛋白,其来自Streptococcus pyogenes,由于PAM识别序列仅为2个碱基(GG),因此可以在所有的基因中找到大量靶点,从而得到广泛的应用。Cas9 蛋白在目前测试过的几乎所有生物和细胞中均有活性,包括细菌、酵母、植物、鱼、以及哺乳动物细胞。识别 RNA(gRNA)可以通过载体表达或者化学合成后与 Cas9 蛋白共同进入细胞,对特异 DNA 序列剪切,从而促使 DNA 发生 NHEJ ( nonhomologous end-joining)介导的基因缺失或同源重组,实现基因敲除及敲入。

 

产品信息:

针对NCBI上已经录入的每个基因,赢润生物均可提供相对应的基因敲除/定点突变试剂盒。您在订购时,只需要告诉我们您的目的基因名称或定点突变位点即可。

 

附:敲除载体信息:

该Cas9/sgRNA载体可在哺乳动物细胞内同时表达人源化Cas9蛋白和sgRNA,只需转染一个质粒及表达嘌呤霉素抗性基因的pCMV-puro质粒就能实现对靶基因的切割。载体中的 CMV 启动子可在绝大多数哺乳动物细胞中高效表达。人源化的Cas9蛋白现已证实在人,大鼠和小鼠细胞中表达良好。U6启动子属III类RNA启动子,有精确地转录起始位点和终止位点,可以准确的转录出sgRNA,并且在各种动物细胞中都表达良好。识别的靶序列由 U6 启动子起始信号 G,19nt靶点以及PAM序列NGG构成,因此识别靶点为GN19GG。

目前本公司已开发出上百个人类基因有效敲除的GoldTestTM靶点载体,有效基因敲除的靶点载体验证工作持续开展中,全力打造国内最大的预验证基因敲除靶点库。

 

产品有效性验证标准流程:

1.设计包含sgRNA切割序列的高特异性PCR引物,PCR产物长度在200-400bp范围内,sgRNA切割位点需在PCR产物中间位置;

2.sgRNA靶点载体转染293T细胞,72h后提取细胞基因组DNA;

3.以第二步获得的基因组DNA为模板,利用第一步设计的引物进行测序; 

4.有效的sgRNA靶点载体处理过的细胞系后,其基因组DNA测序峰图中可显出嵌套杂峰。

 

*试剂盒内均附详细实验步骤说明书

 

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