mirshRNA表达载体构建

服务简介：

普通的带有荧光标记(以绿色荧光为例)的shRNA真核表达框结构为:

pol Ⅲ型启动于(如hU6) ---shRNA---CMV promoter---EGFP---Poly A

这种shRNA表达框的优点是广谱表达、精确终止。但是由于用的是pol Ⅲ型启动子，shRNA的表达量一般，且由于pol Ⅲ型启动子的广谱表达性，容易造成非特异性干扰。

为了弥补上述不足，研究者们设计出了新型的mirshRNA真核表达框结构(以mir30结构为例)：

pol Ⅲ型启动子(如CMV promoter) ---EGFP---mir30左臂---shRNA---mir30右臂Poly A

这种mirshRNA真核表达框有以下优点:

1. 由于采用了CMV等强启动子， shRNA表达量大大提高；
2. 由于EGFP和shRNA连在一起，绿色荧光强度将直接反映shRNA的表达量；
3. 由于采用了microRNA 的双臂，增强了Dicer酶的剪切效率，使得最终形成的siRNA的数量和干扰效率都大大提高；
4. 启动子可换成组织特异性的pol Ⅲ型启动子，可实现对特定组织或细胞的特异性干扰。

由于mirshRNA真核表达框具有上述优点，现在已经有越来越多的研究者将其应用于RNA干扰研究中，冷泉港、Ambion等公司和机构都己推出了基于mir30的mirshRNA真核表达载体。

本公司根据以上结构，构建了自己的mirshRNA真核表达载体，结构和Ambion等公司的产品基本一致，而价格却要大大低于国外同类产品。

以此系列mirshRNA真核表达载体为平台，本公司可以为您构建shRNA表达量更高、干扰效率更好、能够做到特异性干扰的shRNA表达质粒，而且其价格和构建普通的shRNA真核表达载体一样，都仅仅只需1500元/条，订购三条以上还有优惠！

TIPS: 什么情况下选择mirshRNA结构?

过去，在软件设计出的shRNA序列有效性普遍偏低，RNA干扰效率较难提升的时候，mirshRNA结构的推出，受到过研究者们的极大追捧。然而，随着shRNA序列设计软件的逐步优化， RNA干扰实验中采用的shRNA序列的有效性大大提高，即使不采用mirshRNA结构，只用普通的pol Ⅲ型启动于(如hU6) 调控shRNA 的表达，也能获得很高的干扰效率。所以，现阶段，进行普通RNA干扰实验时，己经很少采用mirshRNA结构。

但是， mirshRNA结构却依然有其用武之地。当您的RNA干扰实验需要做到特异性干扰，例如您希望导入的shRNA只在肿瘤细胞中表达及发挥作用，而在正常细胞里则低表达甚至不表达，从而在杀伤或押制肿瘤细胞的同时，不损伤正常细胞，这个时候，则需要用到mirshRNA结构。使用这种结构，您可以随意地选取各种组织特异性或者肿瘤特异性启动子，达到组织或者细胞特异性干扰的目的。而这一点，用普通的pol Ⅲ型启动子(如hU6) 是做不到的。

服务价格及周期:

客户须知:

1. 请事先确定选用默认的CMV启动子还是选用其它特异性启动子；
2. 本公司可根据客户需要，将CMV启动于更换为其它启动子。启动于可以由客户提供，亦可从本公司的Yrbio启动于库购买。更换启动子的相关费用按照"基因克隆"实验费用计算，根据启动子长度而定；
3. 由于小提质粒在转染细胞时，无论是浓度、纯度还是内毒素含量均不是很合格，所以本公司建议您订购一个"转染级质粒大提"服务， 400元/个，至少提供转染级大提质粒100ug。