制备的感受态细胞转化效率较低,请问可能有哪些原因?

①菌液OD值偏大或偏小②原始菌株不好③试剂超纯程度不够④操作时,对菌体伤害过大。影响感受态效率的最重要的因素就是:菌的状态。控制OD就是为了使菌的生长状态达到对数期,此时菌活力最高,处理时要保持这种好的状态,但又要被CaCl2处理充分,使膜局部变化达到最佳的感受状态。从这个意义上说,任何可能影响菌状态的步骤或试剂均有可能最终影响到感受态的转化效率,比如离心力大小、CaCl2的纯度、浓度及处理时间等。