荧光定量PCR实验中，无Ct值(信号)出现，请问是什么原因?

  1. 反应循环数不够:一般都要在32个循环以上，可根据实验情况增加循环数，但高于45个循环会增加过多的背景信号;
  2. 检测荧光信号的步骤有误:一般采用72℃延伸时采集荧光， Taqman方法则一般在退火结束或延伸结束采集信号;
  3. 引物或探针降解:可通过PAGE 电泳检测其完整性;
  4. 探针设计不佳:设计探针退火温度低于引物退火温度，造成探针未杂交上而产物己延伸;
  5. 模板量少:对未知浓度的样品应从系列稀释样品的最高浓度做起;
  6. 模板降解:避免样品制备中杂质的引入以及模板反复冻融的情况发生。