要纯化的蛋白是一种酶，过完阴离子柱后还有酶活，但接着再过个疏水层析柱就没有蛋白吸收峰也没有酶活了，蛋白去了哪里?所用疏水层析柱柱体积只有1ml ，是否有影晌?

我怀疑你的蛋白也许在苯基柱子上没有洗下来，你可以用20% 乙二醇水洗看看有没有东西，和柱子大小关系不大。