连接反应后转化效率很低或阳性克隆非常少，请问有哪些原因？怎样解决？

  1. 可能感受态细胞转化效率太低，用质粒作为阳性对照检测感受态的转化效率；
  2. 可以尝试提高载体或插入片段的纯度，对于平端连接需注意适当延长连接时间；
  3. 可能载体酶切不够充分，用未经连接的载体转化作为阴性对照；
  4. 连接体系不合适，如连接酶可能失活或活性下降，更换新的连接酶及Buffer；
  5. 连接条件不合适，温度或反应时间不合理，请仔细参照连接酶的产品说明书。