DNA测序样品要求

菌液

  1. 请您最好提供 200 μ l 以上新鲜菌液,装在 1.5 ml 离心管中并用封口膜封好交给我们的工作人员或快递邮寄;或者提供 4ml 新鲜菌液,我们可直接进行质粒的提取。
  2. 我们的常规培养基为 LB ,培养温度为 37 ℃ ,常规抗生素为氨卞青霉素、卡那霉素、氯霉素。您的样品如果需要特殊培养要求 , 请您提供 4ml 新鲜菌液;如果使用特殊抗生素,请您一定提供储存液并告知浓度以及工作浓度。除此之外,您还可以提供平板菌、穿刺菌或者甘油菌。
  3. 请详细填写送样单上关于样品的一切信息,包括样品的名称、载体名称、抗生素、引物名称、插入片段长度、反应个数、是否测通、有无特殊结构等;
  4. 如果您在引物一栏填写“通用引物”,最好能提供您的酶切位点( T 载体的常规克隆可以不填);
  5. 如您自己提供特殊引物测序,请标明引物的位置——载体上还是目的片段上,同时提供引物序列。

质粒

  1. 如果您的质粒纯度可以达到全自动测序的要求,即: OD260/OD280=1.6~2.0 ,也可以直接提供质粒。要求浓度 >200ng/ μ l ,提供 10 μ l 以上;
  2. 请您提取质粒模板时注意:提取的质粒模板要求纯度高。提取以后的 DNA 模板要溶解于无菌去离子水。浓度要求 >200ng/ μ l ,(载体较大的,请提供 >500ng/ μ l ),提供 10 μ l 以上(一般情况下,经测序部检测合格后才可使用)。 请您务必写明;
  3. 除抗生素类型外,填单要求与菌液的第 3 、 4 、 5 条一样。

PCR 未纯化产物

  1. 我们将进行琼脂糖凝胶电泳纯化。回收后的产物无论测序成功与否,我们将收取一定的纯化费用;
  2. 提供的样品必须经过鉴定,达到要求再送来测序,以免耽误您的实验。一般来讲, 2 μ l 上样电泳检测,能看到明显的目的条带,送样两 30-50 μ l ;
  3. 除“载体名称、抗生素”与克隆样品相关的信息外,送样单上其余信息必须填写详细;
  4. 提供经 PAGE 纯化的引物,浓度大于 5pmol/ μ l ,引物序列。

PCR 已纯化产物

  1. 条带必须单一,纯度 OD260/OD280=1.6~2.0 ;
  2. 溶解在灭过菌的去离子水中,浓度要求 >50 ng/ μ l ,提供 10 μ l 以上;
  3. 其余要求与 PCR 未纯化产物中第 3 、 4 条要求一致。